近日，Cell Research在線發表了MK体育平台附屬眼耳鼻喉科醫院舒易來主任、李華偉教授題為“Treatment of autosomal recessive hearing loss via in vivo CRISPR/Cas9-mediated optimized homology-directed repair in mice”（CRISPR/Cas9介導優化型同源修復策略治療常染色體隱性遺傳性耳聾）的報道。該研究用高效的基因治療遞送載體以轉染聽覺內毛細胞，用一種優化的HMEJ（同源臂介導的末端接合）的基因敲入方法精準修復Klhl18lowf耳聾模型的點突變，實現在體Klhl18基因有效編輯，恢復感受聲音的內毛細胞靜纖毛形態，糾正耳聾小鼠模型的聽覺功能長達治療後6個月。這是首個基於CRISPR/Cas9-HMEJ治療隱性遺傳性感音神經性聾成功的研究，為遺傳性耳聾的精準治療以及臨床轉化提供了強有力的科學證據。
耳聾是人類最常見的感官功能致殘性疾病，中國聾兒康復研究中心的研究數據顯示，我國聽力障礙人群占人口總數為15.8%，約2億人；患致殘性聽力障礙，即中度以上聽力障礙的人占總人口的5.2%，約7000萬人。我國每年新生3萬聾兒，其中60%是先天的遺傳因素引起。目前已經發現超過100個基因與耳聾相關，但臨床上尚無任何藥物可用於治療遺傳性耳聾。在非綜合征型遺傳性耳聾中，80%是隱性遺傳性耳聾，最佳的治療方法是對基因突變位點進行精準地修復，進而長久地恢復聽力。CRISPR/Cas9是新一代基因編輯工具，於2020年獲得諾貝爾獎。基於CRISPR/Cas9系統，合作研究團隊開發了一種稱為HMEJ的基因敲入方法，為遺傳性疾病的精準靶向基因治療等提供了廣闊的治療前景。研究團隊以HMEJ策略，在Klhl18lowf隱性遺傳性耳聾小鼠模型上進行精準基因治療。
基因修復系統精確糾正點突變、恢復聽覺內毛細胞形態及電生理，顯著改善隱性遺傳性耳聾小鼠聽力
MK体育平台附屬眼耳鼻喉科醫院的耳聾基因治療研究團隊與中國農業科學院基因組研究所、中國科學院的研究團隊合作，首先針對Klhl18基因突變位點設計、篩選和構建了HMEJ治療體系。體外篩選發現sgRNA2的效率較高。並發現突變位點明顯得到了的糾正，且不產生明顯的脫靶編輯。以AAV包裝CRISPR/Cas9-HMEJ基因修復體系，將其顯微註射至Klhl18小鼠的內耳。體內編輯檢測表明，治療系統在體成功糾正了基因點突變。掃描電鏡觀察到，在治療後小鼠耳蝸部分內毛細胞具有正常或接近正常的纖毛束形態。聽性腦幹反應測試顯示治療後，聽覺明顯得到糾正，且治療效果持續至至少6月（實驗觀察期）。電生理檢測結果顯示，治療後內毛細胞膜電容恢復至接近正常水平。本研究實現Klhl18隱性遺傳性耳聾模型聽覺功能的持久改善，為最終在人類隱性遺傳性耳聾及其他器官系統隱性遺傳性疾病中實現安全、持久的基因治療提供科學依據。
MK体育平台附屬眼耳鼻喉科醫院李華偉教授、舒易來主任和中國農業科學院（深圳）基因組研究所左二偉研究員為共同通訊作者，眼耳鼻喉科醫院顧晰博士後、王大奇博士後和胡新德博士後（中國科學院神經科學研究所）為共同第一作者，同時也得到眼耳鼻喉科醫院李耕林研究員和中國科學院神經科學研究所楊輝研究員的合作支持。
我校眼耳鼻喉科醫院李華偉教授、舒易來主任團隊長期致力於感音神經性聾的前沿科學創新性探索和臨床轉化，包括遺傳性耳聾基因治療、內耳毛細胞再生、聽覺保護研究和臨床轉化。前期已經利用基因編輯技術成功對顯性遺傳性耳聾（Myo6耳聾）模型進行了治療，實現了聽覺恢復（Molecular Therapy 2021）；還在耳毒性藥物引起的後天性耳聾模型中，實現了耳聾的保護和治療（Genome Biology，2021）。在不懈的探索中，本次對隱性遺傳性耳聾成功實現了治療，從而為先天性耳聾（顯性遺傳和隱性遺傳）和後天性耳聾患者的基因治療均提供了臨床轉化的科學證據。
